柱層析硅膠的操作方法及注意事項

1.色譜柱填充

操作要點: 裝柱前，應(yīng)在柱底墊一層脫脂棉，防止吸附劑泄漏

有兩種方法:千包裝和濕包裝

(1)安裝:柱硅膠通過漏斗不中斷地安在中，形成細(xì)流，慢慢加入管道，在硅膠也可以用像膠錘輕輕敲擊，使硅膠填料連續(xù)、均勻、緊密。在裝滿后，打開活蜜端，倒入洗滌劑洗掉，排出柱內(nèi)空氣，保持一定液位

(2)濕料:將開始使用的淋浴波放)色潛中，打開下活塞，讓淋浴波慢慢流出。然后將硅膠慢慢連續(xù)地倒入柱中或?qū)⒐枘z懸浮液和適量的洗脫液慢慢地加入柱中)。硅膠受重力驅(qū)動，洗脫液在柱中自由沉降，在此期間，流出的波體應(yīng)不斷地加入到柱中，以保特一定的液位，直到加入硅膠，柱中的沉降不會改變，然后在硅膠。入一小塊濾紙或一點脫脂棉。根據(jù)添加的樣品量，將洗脫液的液位控制在一定高度。2.上樣

將待分離的樣品溶解在少量用于裝的洗脫波中，制成小體積,高濃度樣品溶液，加入色潛的柱層硅膠表面。如果樣品不溶于色潛性裝掛所用的洗脫液，將樣品解在揮發(fā)性溶劑中，加入適量硅膠(不超過色潛柱中硅膠總量的1/10)，用它充分混合去除溶劑，將裝有樣品的硅膠均勻加入柱頂始終保持淋洗液在一定水平)，然后覆蓋層硅膠。注意沿柱內(nèi)壁慢慢加入樣品，始終保持柱層硅膠上表面光滑;樣品量為硅膠的1/60~1/30。

3.洗脫

通過薄層色譜法選擇洗脫液。一般來說TLC顯影時Rf值為0.2~0.溶劑系統(tǒng)為良好的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫首先，打開色柱下端的活塞，使洗脫液的流速保持在1-2滴/。在上端連續(xù)添加洗脫液(可使用分液漏斗控制加入速度與下端相似)，如果單一溶劑的洗脫效果不好可以用混合溶劑(一般不超過三種溶劑 進(jìn)行洗脫，通常采用梯度洗脫。洗脫液的洗脫能力從弱到強逐漸增加。4.采集處理

用等于二氧化硅含量的等分試樣收集洗脫液。通過薄層定性檢查每種洗脫液，并將含有相同成分的洗脫液結(jié)合起來。一定的單一成分通?？梢酝ㄟ^濃縮和重結(jié)晶來獲得。如果它仍然是幾種單一成分的混合物，單一成分的結(jié)晶就不容易沉淀。需要進(jìn)一步的色譜或通過其他方法進(jìn)行分離。