1. 色譜柱的平衡 

     反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。 每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得的”補(bǔ)償”，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！操作步驟：

    a. 平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡）

    b. 如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水”過渡”即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡； 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。

    2． 色譜柱的再生

     長期使用的色譜柱，往往柱效會下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）。可以對色譜柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個廉價的泵進(jìn)行柱子的再生。　 

    建議用來沖洗柱子的溶劑體積

    色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積

    125-4mm 1.6ml 30ml

    250-4 mm 3.2ml 60ml

    250-10mm 20ml 400ml

    選擇再生方法：

    極性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料）的再生：

    正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

    非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等）的再生： 水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水

    注意：

    a. 柱層析硅膠廠家在對NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 

    b. 0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

    3. 色譜柱的維護(hù) 

    a．使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）

    b．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不大于該色譜柱的pH范圍

    c．避免流動相組成及極性的劇烈變化

    d．流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

    e．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中

    f．氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。