色譜法，又稱層析法.是一種以分配平衡為機(jī)理的分配方法，色譜體系包含兩個(gè)相,一個(gè)是固定相,一個(gè)是流動(dòng)相。當(dāng)兩相相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，反復(fù)多次的利用混合物中所含各組分分配平衡性質(zhì)的差異，達(dá)到彼此分離的目的。它是純化和分離有機(jī)或無(wú)機(jī)物的一種方法。

色譜法按固定相的狀態(tài)可分為柱色譜、平板色譜和棒色譜三種，而實(shí)驗(yàn)室和實(shí)際中常用的是柱層析硅膠和薄層硅膠板，以及它們之間的配合應(yīng)用。

柱層析硅膠

吸附色譜原理

在一定條件下硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生作用，這種作用主要是物理和化學(xué)作用,兩種物理作用來(lái)自于硅膠表表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力，化學(xué)作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用。

柱層析硅膠的實(shí)際應(yīng)用

以實(shí)驗(yàn)室為例具體的操作步驟如下：

硅膠的準(zhǔn)備

準(zhǔn)備一定數(shù)量的柱層析硅膠，如200-300目的規(guī)格。

實(shí)驗(yàn)儀器準(zhǔn)備

一支玻璃色譜柱柱,一個(gè)鐵架臺(tái),燒杯,錐形瓶，徑口直徑較大的玻璃漏斗,一支玻璃棒。

裝柱

柱層析硅膠的加入

方法有干法和濕法兩種，下面具體介紹操作方法。

①干法:將硅膠一次加入色譜柱，振動(dòng)管壁使其均勻下沉，然后沿管壁緩緩加入開(kāi)始層析時(shí)使用的流動(dòng)相，或?qū)⑸V柱下端出口加活塞，加入適量的流動(dòng)相，旋開(kāi)活塞使流動(dòng)相緩緩滴出，然后自管頂緩緩加入硅膠，使其均勻地潤(rùn)濕下沉，在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。操作過(guò)程中應(yīng)保持有充分的流動(dòng)相留在硅膠的上面。

②濕法:將硅膠與流動(dòng)相混合，攪拌以除去空氣泡，徐徐傾入色譜柱中，然后再加入流動(dòng)相，將附著于管壁的吸附劑洗下，使色譜柱表面平整。填裝硅膠所用流動(dòng)相從色譜柱自然流下，液面將柱表面相平時(shí)，即加試樣溶液.