一.立柱安裝

操作要點(diǎn)：裝填前在塔底墊一層吸附棉，防止吸附劑泄漏。

有兩種方法加載柱干法和濕法。

（1）干柱裝填：硅膠通過(guò)漏斗裝入柱內(nèi)，中間不間斷，形成滴流，緩慢加入管內(nèi)。青島層析硅膠廠家也可以用橡皮槌敲擊柱子，使硅膠填充連續(xù)、均勻、致密。柱安裝完畢后，打開下端活塞，注入洗脫液洗脫，排出柱內(nèi)空氣，保持一定的液位。

（2）柱濕載：將待用洗脫液裝入柱內(nèi)，打開下端活塞，使洗脫液緩慢流出。然后將硅膠緩慢、連續(xù)地倒入柱中（或?qū)⒐枘z與適量洗脫液混合，形成懸浮液，緩慢地加入柱中）。硅膠在重力和洗脫液的作用下可以在柱中自由沉降。在此期間，流出的洗脫液應(yīng)繼續(xù)加入柱內(nèi)，保持一定的液位，直到硅膠完全加入，柱內(nèi)沉降不再發(fā)生變化。然后在硅膠上加一小塊濾紙或一點(diǎn)吸水棉。根據(jù)樣品量，將洗脫液的液位控制在一定的高度。

均質(zhì)：攪拌成勻漿。加入兩倍于干硅膠體積的溶劑，用玻璃棒充分?jǐn)嚢琛Ｈ绻疵撘簽槭兔?乙酸乙酯/丙酮體系，則與石油醚混合；如果洗脫液為氯仿/乙醇體系，則與氯仿混合。如果不能攪拌成勻漿，說(shuō)明溶劑中的水含量過(guò)高，特別是乙酸乙酯/丙酮。如果與水不相容要去除分配色譜，必須事先用無(wú)水硫酸鈉長(zhǎng)期干燥。氯仿用無(wú)水氯化鈣干燥以除去1%的酒精。如果樣品對(duì)酸敏感，則不能使用氯仿系統(tǒng)通過(guò)色譜柱。

2.裝載樣品

將待分離樣品溶于柱載時(shí)使用的少量洗脫液中，制備體積小、濃度高的樣品溶液，并將樣品溶液加入色譜柱硅膠表面。如果樣品未溶解在柱載用的洗脫液中，則將樣品溶解在揮發(fā)性溶劑中，加入適量硅膠（不超過(guò)柱中硅膠總量的1/10）并與之充分混合，除去溶劑，將與樣品混合的硅膠均勻地添加到柱的頂部（始終保持一定液位的洗脫液），然后覆蓋一層硅膠。

裝樣時(shí)注意沿柱內(nèi)壁緩慢加入，始終保持硅膠上端面平整。進(jìn)樣量為硅膠的1/60～1/30。

三.洗脫

洗脫劑可通過(guò)薄層色譜法進(jìn)行選擇。薄層色譜時(shí)，Rf值為0.2~0.3的溶劑體系一般采用梯度洗脫。

首先，打開柱下端活塞，保持洗脫液流速為每秒1~2滴。在上端連續(xù)加入洗脫劑（加入速度可由分液漏斗控制，與下端流出速度相似）。如果單一溶劑的洗脫效果不好，可以用混合溶劑進(jìn)行洗滌（一般不超過(guò)三種溶劑），通常采用梯度洗脫。洗脫液的洗脫能力由弱變強(qiáng)。

四.收集和處理

洗脫液以相等的比例收集，每個(gè)部分的量大約等于使用的硅膠的量。用薄層法對(duì)每種洗脫液進(jìn)行定性檢測(cè)，并將含有相同組分的洗脫液進(jìn)行組合。經(jīng)過(guò)濃縮和再結(jié)晶，通?？梢缘玫絾误w組分。如果仍然是幾個(gè)單體組分的混合物，則單體組分的結(jié)晶不易分離出來(lái)。需要進(jìn)一步的色譜分析或通過(guò)其他方法進(jìn)行分離。

注：（1）柱層析比薄層色譜具有更強(qiáng)的分離能力和更好的分離效果，特別是對(duì)于結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)相似、薄層色譜分離困難的組分。

（2）洗滌塔時(shí)，不要使用含水的混合溶劑。